Diluição para OD alvo

Informe a OD inicial medida, a OD desejada e o volume final em mililitros. O resultado fornece os volumes de pipetagem dos dois componentes e o fator de diluição. Ela foi desenvolvida para o planejamento rotineiro de culturas de bactérias, leveduras e outras suspensões quando as duas medições de OD usam o mesmo comprimento de onda e método.

Informe medições diretamente comparáveis

Comece pela densidade óptica da cultura densa, pela densidade óptica menor exigida na próxima etapa e pelo volume total que você pretende preparar. As leituras inicial e alvo devem ser obtidas com o mesmo comprimento de onda, o mesmo método do instrumento e cubetas ou recipientes compatíveis. A densidade óptica é uma medida relativa de turbidez; portanto, combinar leituras coletadas em condições diferentes pode gerar uma diluição aritmeticamente correta, mas biologicamente enganosa. Use uma OD inicial que represente a cultura no momento em que a alíquota será retirada. Se o instrumento tiver uma faixa linear limitada, meça uma amostra adequadamente diluída e corrija essa leitura antes de informá-la. Digite o volume final da preparação em mililitros, e não o volume de meio que já está disponível. O alvo não pode ser maior que a OD inicial, pois esta calculadora apenas adiciona meio fresco e não consegue concentrar uma cultura. Os três valores devem ser finitos e maiores que zero. Antes de pipetar, confirme se o volume de cultura calculado é adequado à faixa de precisão da pipeta ou do sistema dispensador disponível.

Entenda o cálculo e os volumes apresentados

A calculadora aplica a conservação do produto OD-volume, geralmente expressa como OD inicial multiplicada pelo volume de cultura igual a OD alvo multiplicada pelo volume final. Ela reorganiza essa relação para encontrar o volume de cultura e depois subtrai esse valor do volume final solicitado para obter o volume de meio fresco. O fator de diluição corresponde à OD inicial dividida pela OD alvo. Por exemplo, uma diluição de seis vezes usa uma parte de cultura em seis partes totais, e as outras cinco partes são preenchidas com meio fresco. Os valores apresentados são arredondados apenas para produzir uma saída estável e legível; o cálculo utiliza diretamente os números enviados. O volume final reaparece no resultado para que você possa conferir a preparação sem consultar novamente a entrada. Considera-se que a densidade óptica seja proporcional à concentração celular na faixa relevante. Essa hipótese é útil no planejamento rotineiro, mas não compensa resposta não linear do instrumento, sedimentação, agregação, bolhas, branco incorreto nem diferenças entre contagem de células viáveis e turbidez.

Prepare, misture e confira a cultura diluída

Transfira o volume calculado de cultura para um recipiente limpo e adicione o volume calculado de meio fresco até atingir o total solicitado. Misture completamente com um método apropriado ao organismo e ao recipiente, pois uma amostra sem homogeneização pode produzir uma leitura de OD que não representa a preparação. Use um meio com a mesma formulação e as mesmas características de branco previstas no protocolo seguinte. Para alíquotas pequenas, escolha uma pipeta cuja faixa de trabalho abranja o resultado com folga; se a alíquota necessária for pequena demais para uma transferência confiável, prepare uma diluição intermediária ou aumente o volume final mantendo a mesma proporção. Depois de misturar, meça novamente a OD quando a exatidão for importante. Variação experimental normal, precisão do instrumento, líquido residual nas ponteiras e heterogeneidade da cultura podem afastar o resultado observado do alvo matemático. Esta ferramenta planeja uma diluição direta em uma única etapa e não modela crescimento posterior, fase de latência, morte celular nem alterações durante a incubação. Registre a leitura inicial, os volumes calculados, o lote do meio e a leitura de conferência para garantir a reprodutibilidade.