Calculadora de concentración de ADN y ARN desde A260

Selecciona el factor estándar para ADN bicatenario, ADN monocatenario o ARN y ajusta el resultado por la dilución y la longitud del paso óptico. Informa valores equivalentes en microgramos por mililitro, nanogramos por microlitro y miligramos por mililitro, además del factor y la fórmula empleados para que usted pueda verificar y registrar el cálculo.

Elija el factor correspondiente al ácido nucleico

Una lectura A260 no se convierte en concentración hasta combinarla con un factor adecuado. Esta calculadora utiliza los factores convencionales para ácidos nucleicos relativamente puros medidos con un paso óptico de un centímetro: 50 microgramos por mililitro para ADN bicatenario, 33 para ADN monocatenario y 40 para ARN cuando A260 es uno. Seleccione el material que realmente predomina en la muestra. No elija ADN bicatenario solo porque se empleó un protocolo de extracción de ADN; una preparación formada principalmente por cadenas cortas individuales necesita el factor monocatenario, mientras que una preparación de ARN requiere el factor de ARN. Estos factores estándar son estimaciones prácticas, no coeficientes de extinción específicos de una secuencia. Los oligonucleótidos cuya composición de bases se conoce pueden calcularse con mayor precisión a partir de su secuencia. El factor devuelto deja explícita la suposición y ofrece un valor trazable para un cuaderno, un registro de calidad o un cálculo posterior. En una mezcla, el resultado es una estimación basada en la clase predominante seleccionada.

Introduzca correctamente la dilución y el paso óptico

Use la absorbancia después de restar el blanco apropiado, porque la absorción del tampón, la cubeta y el fondo no debe contabilizarse como ácido nucleico. El factor de dilución indica cuánto se diluyó la alícuota medida respecto de la muestra original. Una muestra preparada combinando un volumen de solución madre con diecinueve volúmenes iguales de diluyente tiene un factor de dilución total de veinte, no de diecinueve. Introduzca uno si midió la muestra sin diluir. La calculadora multiplica por ese factor para recuperar la concentración estimada del tubo original. Los factores estándar de A260 suponen un paso de un centímetro. Si su instrumento presenta absorbancia bruta para otra longitud y no la normaliza ya a un centímetro, indique el paso real para dividir el cálculo por esa distancia. Muchos espectrofotómetros de microvolumen informan automáticamente una absorbancia equivalente a un centímetro aunque el paso físico sea menor. En tal caso, mantenga el paso en uno. Consulte la exportación o la configuración del método para no corregir dos veces una lectura ya normalizada.

Interprete la concentración teniendo presentes los límites

El cálculo aplica concentración igual a A260 multiplicada por el factor elegido y el factor de dilución, dividida por la longitud del paso. Los microgramos por mililitro y los nanogramos por microlitro tienen el mismo valor numérico, por lo que se ofrecen ambas unidades para facilitar su uso en protocolos de laboratorio. El resultado es determinista y no evalúa la pureza. La absorbancia a 260 nanómetros puede incluir nucleótidos libres, fenol, proteínas, sales y otros contaminantes; por ello, una conversión matemáticamente correcta todavía puede sobreestimar el ADN o ARN aprovechable. Examine por separado las relaciones de pureza y los controles adecuados, y repita las mediciones fuera del intervalo fiable del instrumento. Los ensayos fluorescentes pueden ser preferibles cuando la concentración es baja, existe contaminación importante o importa la especificidad. Esta herramienta sirve para convertir de forma transparente una medición A260 válida, efectuar controles rutinarios y automatizar procesos reproducibles. No diagnostica la calidad de extracción, no infiere degradación ni certifica la idoneidad para secuenciación, amplificación, clonación o uso clínico.