Calculadora de ADN bicatenario en ng/µL desde A260

Aplica el factor convencional: una A260 de 1.0 equivale a 50 ng/µL con una trayectoria óptica de 1 cm. Introduzca la A260 observada y el factor de dilución total para estimar la concentración de la muestra original. El cálculo es determinista, transparente y adecuado para flujos habituales de cuantificación de ácidos nucleicos.

Introduzca la lectura que midió realmente el instrumento

Utilice la absorbancia indicada a 260 nm para la alícuota colocada en el espectrofotómetro o en el instrumento de microvolumen. La calculadora espera un valor numérico no negativo y presupone que la lectura equivale a una trayectoria óptica de 1 cm, base del factor de conversión convencional para ADN bicatenario. Muchos instrumentos de microvolumen ya normalizan la absorbancia mostrada a esa trayectoria; consulte el resultado o el método del equipo si no está seguro. No introduzca una concentración calculada por el instrumento, porque esta herramienta parte de la absorbancia. Si midió la muestra sin diluir, deje el factor de dilución en 1. Es preferible usar una lectura corregida con blanco, pues la absorbancia del tampón, la cubeta o la superficie de medición puede elevar la estimación. Se rechazan las lecturas negativas en vez de convertirlas en una concentración negativa sin sentido físico. El resultado expresa la concentración másica deducida de A260; no confirma por separado que todo el material absorbente sea ADN bicatenario intacto.

Aplique una sola vez el factor de dilución completo

El factor de dilución recupera la concentración de la muestra original a partir de la alícuota diluida que se midió. Si mezcla una parte de muestra con nueve partes de diluyente, el volumen total contiene diez partes y debe introducir 10. Para una dilución 1:20, introduzca 20. Si realizó varias diluciones sucesivas, multiplique sus factores antes de escribir el valor: una dilución de diez veces seguida de otra de cinco veces da un factor total de 50. La calculadora multiplica la A260 observada por 50 ng/µL por unidad de absorbancia y después por el factor total. Evite corregir la dilución dos veces. Si el software del instrumento ya ajustó por dilución la absorbancia mostrada, use 1; si presenta la lectura sin corregir de la alícuota diluida, indique el factor real. Registrar la dilución junto al resultado permite reproducir el cálculo y distinguir una absorbancia medida baja de una concentración baja en el tubo inicial.

Interprete la estimación dentro de su contexto bioquímico

La concentración devuelta sigue la relación convencional para ADN bicatenario: la concentración en ng/µL es A260 multiplicada por 50 y por el factor de dilución. Esta equivalencia resulta práctica porque 1 ng/µL tiene el mismo valor numérico que 1 µg/mL, de modo que no hace falta convertir unidades. Sin embargo, la absorbancia no es selectiva para el ADN bicatenario. El ARN, los ácidos nucleicos monocatenarios, los nucleótidos libres, el fenol y otros compuestos pueden contribuir en torno a 260 nm. Los cocientes de pureza A260/A280 y A260/A230, un blanco apropiado y un ensayo fluorescente específico para ADN bicatenario pueden ser importantes cuando se necesita selectividad o precisión a baja concentración. La calculadora tampoco evalúa fragmentación, amplificabilidad ni integridad biológica. Considere el resultado como una estimación de concentración másica derivada de A260 bajo la convención de 1 cm. Para reacciones posteriores, compárelo con los requisitos del ensayo, la pureza prevista y el intervalo de precisión del instrumento, en lugar de depender únicamente del número calculado.