DNA- und RNA-Konzentration aus A260 berechnen

Er wählt den Standardfaktor für doppelsträngige DNA, einzelsträngige DNA oder RNA und berücksichtigt Verdünnung sowie optische Weglänge. Das Ergebnis enthält gleichwertige Angaben in Mikrogramm pro Milliliter, Nanogramm pro Mikroliter und Milligramm pro Milliliter. Außerdem werden Faktor und Formel ausgegeben, damit Sie die Berechnung prüfen und dokumentieren können.

Wählen Sie den passenden Nukleinsäurefaktor

Ein A260-Messwert ergibt erst zusammen mit einem geeigneten Umrechnungsfaktor eine Konzentration. Der Rechner nutzt die üblichen Faktoren für relativ reine Nukleinsäuren bei einem optischen Weg von einem Zentimeter: 50 Mikrogramm pro Milliliter für doppelsträngige DNA, 33 für einzelsträngige DNA und 40 für RNA, wenn A260 eins beträgt. Wählen Sie den Stoff, der in der Probe tatsächlich überwiegt. Entscheiden Sie sich nicht allein deshalb für doppelsträngige DNA, weil ein DNA-Extraktionsprotokoll verwendet wurde. Eine Präparation mit überwiegend kurzen Einzelsträngen benötigt den Faktor für einzelsträngige DNA, eine RNA-Präparation den RNA-Faktor. Diese Standardwerte sind praktische Näherungen und keine sequenzspezifischen Extinktionskoeffizienten. Oligonukleotide mit bekannter Basenzusammensetzung lassen sich anhand ihrer Sequenz genauer berechnen. Der ausgegebene Faktor macht die Annahme sichtbar und liefert einen nachvollziehbaren Wert für Laborbuch, Qualitätsnachweis oder Folgerechnung. Bei Mischungen bleibt das Ergebnis eine Schätzung anhand der ausgewählten vorherrschenden Klasse.

Geben Sie Verdünnung und Weglänge korrekt ein

Verwenden Sie die Absorption nach Abzug des passenden Leerwerts, da die Absorption von Puffer, Küvette und Hintergrund nicht als Nukleinsäure zählen darf. Der Verdünnungsfaktor beschreibt, wie stark der gemessene Anteil gegenüber der ursprünglichen Probe verdünnt wurde. Eine Mischung aus einem Volumen Stammlösung und neunzehn gleichen Volumina Verdünnungsmittel hat den Gesamtfaktor zwanzig, nicht neunzehn. Geben Sie eins ein, wenn die Probe unverdünnt gemessen wurde. Der Rechner multipliziert mit diesem Faktor, um die geschätzte Konzentration im ursprünglichen Gefäß zu bestimmen. Standardfaktoren für A260 setzen einen optischen Weg von einem Zentimeter voraus. Liefert Ihr Gerät eine rohe Absorption für eine andere Weglänge, ohne sie bereits auf einen Zentimeter zu normieren, geben Sie die tatsächliche Länge ein. Viele Mikrovolumen-Spektrophotometer melden trotz kürzerem physischem Weg automatisch einen auf einen Zentimeter bezogenen Wert. Belassen Sie die Weglänge dann bei eins. Prüfen Sie Export oder Methodeneinstellungen, damit Sie einen bereits normierten Messwert nicht doppelt korrigieren.

Beachten Sie bei der Auswertung die Messgrenzen

Die Berechnung lautet: Konzentration gleich A260 mal ausgewähltem Faktor mal Verdünnungsfaktor, geteilt durch die Weglänge. Mikrogramm pro Milliliter und Nanogramm pro Mikroliter besitzen denselben Zahlenwert; beide Einheiten werden deshalb für die direkte Verwendung in Laborprotokollen angegeben. Das Ergebnis ist deterministisch, bewertet aber nicht die Reinheit. Zur Absorption bei 260 Nanometern können freie Nukleotide, Phenol, Proteine, Salze und andere Verunreinigungen beitragen. Eine mathematisch korrekte Umrechnung kann daher die nutzbare DNA- oder RNA-Menge überschätzen. Prüfen Sie Reinheitsverhältnisse und geeignete Kontrollen getrennt und wiederholen Sie Messungen außerhalb des zuverlässigen Gerätebereichs. Bei niedrigen Konzentrationen, deutlicher Kontamination oder benötigter Spezifität können Fluoreszenztests geeigneter sein. Der Rechner dient der transparenten Umrechnung einer gültigen A260-Messung und reproduzierbarer Automatisierung. Er diagnostiziert weder Extraktionsqualität noch Abbau und bestätigt keine Eignung für Sequenzierung, Amplifikation, Klonierung oder klinische Anwendungen.