Massa del dsDNA in concentrazione molare

Usa il numero di coppie di basi e una massa molecolare media per coppia, pari per impostazione predefinita a 660 g/mol per bp. Il risultato consente di preparare diluizioni, normalizzare campioni, confrontare costrutti di lunghezza diversa e ricavare quantità basate sulle molecole da misure di massa. Lei può sostituire il valore medio quando il protocollo richiede un’altra ipotesi.

Inserisca concentrazione in massa e lunghezza corretta

Parta dalla concentrazione in massa misurata del DNA a doppio filamento e selezioni l’unità appropriata. Sono disponibili ng/µL, µg/mL, mg/mL e g/L, tutti normalizzati in grammi per litro. Indichi quindi la lunghezza di una molecola come numero intero positivo di coppie di basi. Comprenda vettore, inserto, adattatori e ogni altro segmento a doppio filamento presente nella molecola. Un plasmide di 5,000 bp va inserito come 5000, non usando solo la lunghezza di una sua caratteristica. A parità di massa, molecole corte e lunghe corrispondono a numeri diversi: una molecola più corta ha massa molecolare inferiore e molarità superiore. La concentrazione può essere zero, mentre la lunghezza deve essere positiva. Valori non finiti, coppie frazionarie, concentrazioni negative e unità non supportate vengono rifiutati per evitare risultati plausibili ottenuti da dati non validi.

Comprenda l’approssimazione e la formula

Il calcolo stima la massa molecolare moltiplicando le coppie di basi per la massa media di ciascuna coppia. Il valore predefinito di 660 g/mol per bp è un’approssimazione comune per il DNA a doppio filamento. Un costrutto di 5,000 bp pesa quindi circa 3,300,000 g/mol. La concentrazione molare è la concentrazione normalizzata in g/L divisa per tale massa in g/mol; il risultato viene espresso anche in µM, nM e pM. Per esempio, 50 ng/µL equivalgono a 0.05 g/L e, con 5,000 bp, danno circa 1.515 × 10^-8 mol/L, cioè 15.15 nM. Poiché 660 è una media e non una massa esatta ricavata dalla sequenza, Lei può sostituirla quando un kit o un metodo indica un altro valore. La risposta riporta l’ipotesi adottata e la massa totale calcolata, rendendo verificabile la conversione.

Usi il risultato correttamente in laboratorio

Usi la molarità restituita per confrontare costrutti in base al numero di molecole, pianificare pool equimolari, calcolare diluizioni o convertire misure fluorimetriche per ligazione e sequenziamento. Verifichi che gli input siano DNA a doppio filamento e che la lunghezza rappresenti la forma molecolare reale. Lo strumento non misura la concentrazione, non deduce la lunghezza, non analizza sequenze, non corregge la purezza e non modella distribuzioni di frammenti. Per DNA frammentato, una lunghezza media o modale fornisce soltanto una stima da documentare. Le letture di assorbanza possono includere contaminanti e modifiche insolite possono richiedere un’altra massa media. L’accuratezza dipende quindi dalla misura, dalla lunghezza e dall’ipotesi inserite. L’algoritmo è deterministico e senza rete; browser e API condividono lo stesso calcolo. Ogni richiesta automatizzata valida costa $0.002.