Calculadora de DNA dupla fita em ng/µL pela A260

Ela aplica o fator convencional: A260 igual a 1.0 corresponde a 50 ng/µL em caminho óptico de 1 cm. Informe a A260 observada e o fator de diluição total para recuperar a concentração estimada da amostra original. O cálculo é determinístico, transparente e apropriado para rotinas de quantificação de ácidos nucleicos.

Informe a leitura realmente medida pelo instrumento

Use a absorbância indicada a 260 nm para a alíquota colocada no espectrofotômetro ou no equipamento de microvolume. A calculadora aceita um valor numérico não negativo e considera que a leitura equivale a um caminho óptico de 1 cm, convenção que fundamenta o fator padrão de DNA dupla fita. Muitos equipamentos de microvolume já normalizam a absorbância exibida para esse caminho; consulte o resultado ou o método do aparelho caso haja dúvida. Não informe uma concentração calculada pelo próprio instrumento, pois esta ferramenta começa pela absorbância. Se a amostra foi medida sem diluição, mantenha o fator em 1. Prefira uma leitura corrigida pelo branco, porque a absorbância do tampão, da cubeta ou da superfície de medição pode elevar a estimativa. Leituras negativas são recusadas em vez de produzirem uma concentração negativa sem significado físico. O resultado representa a concentração em massa sugerida pela A260, mas não comprova que todo o material absorvente seja DNA dupla fita íntegro.

Aplique uma única vez o fator de diluição completo

O fator de diluição recupera a concentração da amostra original a partir da alíquota diluída que foi medida. Para uma parte de amostra e nove partes de diluente, o volume total tem dez partes; portanto, informe 10. Em uma diluição 1:20, informe 20. Se você realizou várias etapas, multiplique os fatores antes de inserir o valor: uma diluição de dez vezes seguida de outra de cinco vezes resulta em fator total 50. A calculadora multiplica a A260 observada por 50 ng/µL por unidade de absorbância e depois pelo fator total. Evite aplicar a correção duas vezes. Se o software do instrumento já ajustou por diluição a absorbância exibida, use 1; se ele mostra a leitura bruta da alíquota diluída, use o fator total real. Registrar a diluição junto ao resultado torna o cálculo reproduzível e ajuda a diferenciar uma absorbância medida baixa de uma concentração baixa no tubo original.

Interprete a estimativa no contexto bioquímico

A concentração retornada segue a relação convencional do DNA dupla fita: concentração em ng/µL é igual a A260 multiplicada por 50 e pelo fator de diluição. Essa equivalência é prática porque 1 ng/µL possui o mesmo valor numérico que 1 µg/mL, dispensando conversão adicional. Entretanto, a absorbância não é seletiva para DNA dupla fita. RNA, ácidos nucleicos de fita simples, nucleotídeos livres, fenol e outros compostos podem contribuir em torno de 260 nm. Razões de pureza como A260/A280 e A260/A230, um branco adequado e um ensaio fluorescente específico para DNA dupla fita podem ser importantes quando seletividade ou precisão em baixa concentração forem necessárias. A calculadora também não avalia fragmentação, capacidade de amplificação ou integridade biológica. Considere o resultado uma estimativa de concentração em massa derivada da A260 sob a convenção de 1 cm. Em aplicações posteriores, compare-o com os requisitos do ensaio, a pureza esperada e a faixa prática de precisão do instrumento, sem depender apenas do número calculado.